影響東莞電泳加工質量的因素

影響東莞電泳加工質量的因素主要由以下幾個方面造成:

1．電泳介質的pH值

東莞電泳加工溶液的pH值決定帶電物質的解離程度，也決定物質所帶凈電荷的多少.對蛋白質，氨基酸等類似兩性電解質，pH值離等電點越遠，粒子所帶電荷越多，泳動速度越快，反之越慢。因此，當分離某一種混合物時，東莞電泳加工應選擇一種能擴大各種蛋白質所帶電荷量差別的pH值，以利于各種蛋白質的有效分離.為了保證電泳過程中溶液的pH值恒定，必須采用緩沖溶液。

緩沖液的離子強度

溶液的離子強度（Ion intensity）是指溶液中各離子的摩爾濃度與離子價數平方的積的總和的1/2.帶電顆粒的遷移率與離子強度的平方根成反比。低離子強度時，遷移率快，但離子強度過低，緩沖液的緩沖容量小，不易維持pH恒定.高離子強度時，遷移率慢，但電泳譜帶要比低離子強度時細窄。通常溶液的離子強度在0.02～0.2之間。不同帶電顆粒，因其所帶電荷的性質和多少、形狀和大小等差異，使其在同一電場強度、相同的支持介質和緩沖液的條件下，各自的泳動速度不同，從而使各種不同的帶電顆粒如蛋白質、核酸等生物大分子得以分離。帶電顆粒在電場中泳動速度以遷移率(mobility)表示。故遷移率可定義為帶電顆粒在單位電場強度下的泳動速度，是指在1V／m的電場作用下，帶電顆粒每秒鐘移動的距離(m)，其移動速率為m／s，遷移率以m2／(V·s)表示。而在實際應用中以cm2／(V·s)表示，因此通過測量d、l、V、t，便可計算遷移率。

I=1/2∑CiZi2 (I：離子強度；Ci：離子的摩爾濃度；Zi：離子價數. )

0.154M NaCl溶液的離子強度為：

I= 1/2(0.154×12+0.154×12)=0.154

0.015M Na2SO4溶液的離子強度為：

I= 1/2(0.015×2×12+0.015×22)=0.045

3．電場強度

東莞電泳加工電場強度（電勢梯度Electric field intensity）是指每厘米的電位降(電位差或電位梯度）.電場強度對電泳速度起著正比作用，電場強度越高，帶電顆粒移動速度越快。根據實驗的需要，電泳可分為兩種：一種是高壓電泳，所用電壓在500～1000V或更高.由于電壓高，電泳時間短（有的樣品需數分鐘），適用于低分子化合物的分離，如氨基酸，無機離子，包括部分聚焦電泳分離及序列電泳的分離等。因電壓高，產熱量大，必須裝有冷卻裝置，否則熱量可引起蛋白質等物質的變性而不能分離，還因發熱引起緩沖液中水分蒸發過多，使支持物（濾紙，薄膜或凝膠等）上離子強度增加，以及引起虹吸現象（電泳槽內液被吸到支持物上）等，都會影響物質的分離.另一種為常壓電泳，產熱量小，室溫在10～25℃分離蛋白質標本是不被破壞的，無需冷卻裝置，一般分離時間長。電場強度是指每1厘米的電位降，故又稱電位梯度，以V／cm表示。電場強度對泳動速度起決定性作用。在一定范圍內，電場強度愈高，帶電顆粒泳動愈快，根據不同電泳所需電場強度，可分為常壓電泳和高壓電泳。常壓電泳一般在100～500V，高壓電泳一般為500～10000V。紙電泳、醋酸纖維電泳、聚丙烯酰胺和瓊脂糖凝膠電泳只需200～500V,而固相pH值梯度等電聚焦電泳則需要3000～5000V高壓。電壓與支持介質的長度有關，而電流與支持介質的橫截面(或寬度)成正比。大部分電泳用恒壓控制電場強度。在做管狀圓盤電泳時，一般用調節每管的電流(mA)控制電場強度，在電泳過程中，保持穩定的電場強度或穩定的電流，是電泳成功與否的重要條件。

4．電滲現象

東莞電泳加工在電場中液體對于一個固體的固定相相對移動稱為電滲.在有載體的電泳中，影響電泳移動的一個重要因素是電滲。最常遇到的情況是γ-球蛋白，由原點向負極移動，這就是電滲作用所引起的倒移現象.產生電滲現象的原因是載體中常含有可電離的基團，如濾紙中含有羥基而帶負電荷，與濾紙相接觸的水溶液帶正電荷，液體便向負極移動。由于電滲現象往往與電泳同時存在，所以帶電粒子的移動距離也受電滲影響；如電泳方向與電滲相反，則實際電泳的距離等于電泳距離加上電滲的距離.瓊脂中含有瓊脂果膠，，其中含有較多的硫酸根，所以在瓊脂電泳時電滲現象很明顯，許多球蛋白均向負極移動。除去了瓊脂果膠后的瓊脂糖用作凝膠電泳時，電滲大為減弱.電滲所造成的移動距離可用不帶電的有色染料或有色葡聚糖點在支持物的中心，以觀察電滲的方向和距離。

5．分子篩效應

在不同濃度和交聯度的凝膠中，其孔徑大小不同，通過分子篩效應可將不同大小的顆粒進行分離，其分離機制是小分子通過凝膠微孔，而大分子顆粒難通過微孔而使遷移阻滯，從而將被分離的顆粒，按分子大小的順序排列進行分離。